生物SEM|生物扫描电镜|生物摸扫描电镜|微生物扫描电镜|扫描电镜生物样品制备-e测试

预约须知

1. 样品要求：仅接收2.5%戊二醛固定液固定后的生物样品；样品需新鲜取材，放置于1.5mL离心管内，加入固定液，4℃过夜固定。

块状样品：要求在不影响实验目的的前提下，观察面尽量平整，尺寸为厚 2~3mm、长宽 5~6mm。有正反之分的，要能够视觉区分，不能区分要在形状上做标记（可在样本右上角裁剪掉一块，右上角缺失面是正面（即观察面）。固定于固定液，放置于4°C固定12h后可寄送；

细胞样品：用1.5ml的尖底管，离心成团（至少黄豆大小）加入固定液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4°C固定12h后可寄送；需要做原位观察的：要求在细胞爬片上做样，玻璃片宽 3mm，长 5mm，右上角切掉以表正面（即观察面）。

细菌样品要求同上。

2.寄送要求：固定液充满1.5mL离心管，封口膜封口，离心管外用气泡膜或报纸包裹厚一些，放置冰袋2-3个（-20℃冰袋，不要太多），务必与样品隔开，避免低温冰冻造成样品结冰。特殊样品如脂肪、植物等用纱布将样品压到液面以下，保证充分固定。

3. 特别注意：是否需取材、固定、脱水、干燥、导电处理；形貌拍摄由于其特殊性，老师会尽力拍摄，但无法保证一定会拍到您预期效果的图片，敬请理解！

4.每样提供8张拍摄照片（不提供分析服务），如需更多照片请提前与工作人员沟通确认，并且会产生额外费用，请悉知！

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项目介绍

生物扫描电镜主要利用二次电子成像用于拍摄材料的表面形貌情况，拍摄照片为黑白照片；一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等，也可以观察材料在细胞表面的分布情况。

样品要求

样本要求：

1. 样品要求：仅接收2.5%戊二醛固定液固定后的生物样品；样品需新鲜取材，放置于1.5mL离心管内，加入固定液4℃过夜固定。

块状样品：要求在不影响实验目的的前提下，观察面尽量平整，尺寸为厚 2~3mm、长宽 5~6mm。有正反之分的，要能够视觉区分，不能区分要在形状上做标记（可在样本右上角裁剪掉一块，右上角缺失面是正面（即观察面）。固定于固定液，放置于4°C固定12h后可寄送；

细胞样品：用1.5ml的尖底管，离心成团（至少黄豆大小），加入固定液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4°C固定12h后可寄送；需要做原位观察的：要求在细胞爬片上做样，玻璃片宽 3mm，长 5mm，右上角切掉以表正面（即观察面）。

细菌样品要求同上。

2. 打印填写完整的预约单、送样单和样品一起寄送。

样品取材及固定常用方法 :

细胞类：10⁶以上的细胞，用细胞刮刀刮下来，1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于1.5ml或2ml离心管，管底肉眼可见2-3粒大米状样品，如果细胞量很多，把细胞团块用细针尖挑成几个小团块，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。

组织类：新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³，离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中，固定液完全浸没组织，然后放入4℃冰箱过夜。

细菌类：吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。

结果展示

图1：玉米淀粉图2：大肠杆菌图3：金葡菌

常见问题

不导电或导电差的样品，为什么要喷金？

SEM成像，是通过检测器获得二次电子和背散射电子的信号。如样品不导电或导电性不好，会造成样品表面多余电子或游离粒子的累积不能及时导走，一定程度后就反复出现充电放电现象（charging)，最终影响电子信号的传递，造成图像扭曲，变形、晃动等现象，喷金后样品表面导电增强，从而避免积电现象。

细胞原位观察，怎么准备样品？

可以用细胞爬片（可以区分正反面。不能用记号笔标记）培养细胞，培养后装入5mL或者10mL离心管，后续加满戊二醛固定液4℃固定12h，低温保存寄送。

2.5%戊二醛固定液如何配置？

市售25%戊二醛水溶液 10ml

0.2M磷酸盐缓冲液（pH7.0） 50ml

蒸馏水加至 100ml