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免疫共沉淀

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免疫共沉淀须知:

1.简介:

在细胞裂解液中加入抗目的蛋白的抗体,孵育后再加入可与抗体特异性结合,结合与sepharose上的proteinA/G,与细胞中的目的蛋白结合,形成目的蛋白/目的蛋白-抗目的蛋白抗体-proteinA/G复合物,经SDS-PAGE电泳,复合物被分离,经免疫印记检测目的蛋白。

2.服务流程:

免疫共沉淀.png


3.送样须知:

IP级别的抗体;实验样本:组织样品>200mg,细胞样品>2×107 ,蛋白样品>2ml;需要研究的互作蛋白信息(蛋白名称、大小、种属等)。

4.公司服务:

完整实验报告(包括实验相关试剂及设备信息、实验步骤);原始数据及图片;

5.试验周期:

具体试验周期请于工作人员沟通确认。


e测试小贴士:


1、Co-ip实验两个抗体需要不同种源吗?

答:最好选择两个不同种源的抗体。选择同一种源的抗体的问题在于:在WB之前进行的蛋白变性这一步,由于加样缓冲液中含有巯基乙醇,巯基乙醇会把抗体的重链和轻链之间的二硫键破坏,从而使的抗体变成重链分子55KD和轻链分子25KD。


2、免疫共沉淀中没有检测到与目的蛋白相互作用的蛋白或检测得到的信号太弱?

答:裂解液中的去垢剂浓度太高或配方过于剧烈:此时降低去垢剂浓度或更换去垢剂种类;受蛋白的亚细胞定位影响:应重新选择裂解液配方来释放目的蛋白;蛋白与蛋白之间的相互作用太弱或不太稳定:应选择亲和力更高的抗体以捕获更多的目的蛋白,从而捕获更多的相互作用蛋白;过表达提高目的蛋白的含量:选择目的蛋白或相互作用蛋白含量高的样品进行免疫共沉淀实验。



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免疫共沉淀检测

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