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细胞转染

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细胞转染须知:

1.电穿孔法

1.1.简介:

通过脉冲电场,使得细胞膜上产生小孔,通透性被暂时的提高,周围的小分子可以穿过小孔扩散到细胞内。

1.2.服务流程

细胞转染电穿孔.png

2.脂质体转染

2.1.简介:

脂质体作为体内和体外输送载体的工具,已经研究的十分广泛,中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。

2.2.服务流程:

脂质体转染.png

3.磷酸钙沉淀法

3.1.简介:

基于磷酸钙- DNA 复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法,磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。

3.2.实验流程:

磷酸钙.png

4.送样须知:

提供真核表达载体(若无法提供表达载体可选择公司的载体构建服务),以及使用的宿主细胞,目的蛋白抗体及说明书。

5.交付内容:

时转染,完整的实验报告及剩余质粒。稳定转染,完整实验报告,剩余质粒;稳定表达目的蛋白的细胞株

6.试验周期:

瞬时转染1-2周,稳定转染7-9周。

e测试小贴士:

细胞转染需要注意什么?

image.png1、细胞长至60-80%可以取得较高的转染效率,过低多高均会影响转染效果。

          2、用于转染的DNA必须无蛋白质,RNA及其他污染,OD260/280比值应在1.8以上。

          3、转染时要使用无血清培养基,血清会影响复合物的形成。

          4、抗生素对真核细胞无毒,但在细胞转染时转染试剂会影响细胞的通透性,使抗生素进入细胞,从而降低细胞活性。









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