2.动物实验平台

动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。

服务内容：小动物活体成像/Mciro CT/动物PET检测/MRI/水迷宫/动物取材/动物饲养/动物模型构建/动物实验定制

2.1 动物实验

2.1.1 动物模型

简介：当今人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施，本平台专业技术和科学研发于一体，拥有熟练地建模技术，专业的科研人员，可提供完整的模型构建服务。

服务内容：骨质疏松模型/大鼠糖尿病模型/大鼠肺纤维化模型/免疫性关节炎模型/脂肪肝模型等

2.1.2 活体成像/microCT/骨密度分析

名称：小动物活体成像

型号：PE IVIS spectrum

功能：应用于基于小动物模型的癌症、干细胞、感染、炎症、免疫疾病、神经疾病、心血管疾病、代谢疾病、基因治疗等多种疾病分子机理及相关药物研发的临床前研究

2.2 细胞生物平台

细胞生物平台有独立的无菌操作间、生物安全柜、细胞培养箱、液氮罐、显微镜等基础设施。此外，还拥有荧光倒置显微镜、活细胞工作站，可集细胞培养、电生理记录、形态观测和荧光信号记录为一体，模仿活细胞的生活环境，实现细胞的长时间培养、连续观察细胞反应和显微操作；拥有流式细胞仪，可快速测量、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量。细胞生物学平台可提供专业的细胞生物学技术以及细胞生物学类整体服务。

服务内容：细胞培养 /CCK-8/MTT Live/Dead细胞染色/血液相容性测试/流式细胞分析//细胞转染/稳定株筛选/Transwell迁移/侵袭 细胞划痕/线粒体膜电位/外泌体提取/外泌体摄取/外泌体鉴定/细胞生物方案定制

2.2.1 细胞转染及稳定株构建

将所要的目的基因真核到宿主细胞上，随着细胞的生长繁殖，目的基因可以稳定的表达，在通过抗生素的不断筛选，最终得到构建稳定细胞系的过程。相对于瞬时转染，稳定转染技术持续周期长，细胞整合稳定，能够满足后期对蛋白的大量需求。

2.2.2 流式细胞术

在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成。

流式细胞仪的流体系统负责将样品从样品管转移到流动池。一旦通过流动池（并通过激光束），样品将被分选出来（在细胞分选仪中）或移到废液中。

光学系统的元件包括激发光源、透镜和滤光片（用于收集和移动仪器周围的光）以及用于产生光电流的检测系统。

电子系统是流式细胞仪的大脑。来自检测器的光电流经过数字化、处理和保存，以用于后续分析。

2.2.3 细胞死活染色

活/死细胞复染试剂盒可同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。该试剂盒包含钙黄绿素-AM和碘化丙啶(PI)两种溶液，分别用于染色活细胞和死细胞。其中钙黄绿素-AM，即钙黄绿素的乙酰羟甲基酯，具有高度亲脂性和细胞膜透过性。尽管钙黄绿素-AM自身并非荧光分子，但活细胞中的酯酶可以催化钙黄绿素-AM生成钙黄绿素，从而发出强烈的绿色荧光(λex 490 nm, λem 515 nm). 因此钙黄绿素-AM只能染色活细胞。而核染色染料PI不能透过活细胞的细胞膜。但可以透过死细胞膜的变性区域来到达细胞核，并与细胞中的DNA双螺旋结构结合，从而发出红色荧光(λex 535 nm, λem 617 nm)。钙黄绿素和PI-DNA都能被490nm波长的光激发，因此可以采用荧光显微镜同时监测活细胞和死细胞。使用λex激发光时只能观察到死亡细胞。

2.2.4 细胞划痕/侵袭

细胞迁移与侵袭实验将 Transwell 小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

2.3 蛋白免疫平台

蛋白免疫实验室配备完善的蛋白免疫学相关实验设备，拥有专业的技术团队，主要承接以蛋白为研究对象的蛋白纯化，抗体制备等实验研究，我们拥有成熟的免疫检测体系，大量优质的蛋白和抗体产品支撑，先进的实验仪器，经验丰富的技术团队，优良的实验环境，完善的实验平台，为您提供最优质的服务。

服务内容：Western Blot/ ELISA/免疫共沉淀/蛋白含量测试/氨基酸含量测试/单分子免疫荧光（Simoa）/抗体制备/蛋白的原核表达与纯化/重组蛋白/商业蛋白/重组蛋白定制

2.3.1 抗体制备

多克隆抗体可识别多个抗原表位，可以帮助放大低水平表达的蛋白的信号，并且多克隆抗体的制备工艺也较为简单，由于多克隆抗体含有针对多个表位的多种抗体，所以是检测变性蛋白的首选，多个表位通常会提供更强大的检测能力。

单克隆抗体是由一个只识别一种表位的B细胞克隆产生的同源抗体，特异性强，效价高，交叉反应少或无交叉反应，但其制备过程较为复杂。

单克隆抗体技术可针对生物大分子（主要是蛋白质）进行准确定性、定量、定位的手段，如今已经应用至生物研究的各个方面，例如通过细胞表面蛋白标记对细胞进行分类筛选分析的荧光细胞分选技术、展示细胞内特定蛋白定位的高分辨率荧光显微镜、检测蛋白质混合物中特定蛋白表达量的蛋白印迹法，常用于血清中细胞因子表达量测定的酶联免疫吸附测定等，这些技术都需要运用到高质量的单克隆抗体制剂。

多克隆抗体制备

单克隆抗体制备

2.3.2 重组蛋白

重组蛋白是应用了重组DNA或重组RNA的技术通过原核或真核表达方式获得的蛋白质。本公司为您提供原核表达系统，以大肠杆菌表达系统为代表；真核表达系统，例如：酵母菌蛋白表达系统；哺乳动物细胞表达系统，例如：CHO细胞，HEK293细胞等；昆虫细胞表达系统，例如：SF9细胞等。

2.3.3 WB

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测物是蛋白质，将抗体作为探针，标记的二抗作为显色工具。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝 酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的二抗发生反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。

2.3.4 IP/COIP

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。这是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用就被保留了下来。假如用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的proreinA预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的proreinA就可以吸附抗原达到精制的目的。这样的方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用来确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

2.3.5 EMSA

基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合物在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中有不同迁移率的原理。首先让蛋白质与末端标记的核酸探针结合，然后再跑PAGE胶，结合了蛋白质的复合物比未结合蛋白质的探针电泳的速度要慢，这样，从PAGE胶的电泳结果就可以判断，该蛋白是否和特定序列结合或者该序列是否和蛋白结合。

2.3.6 CHIP

在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片段的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

2.4 分子生化平台

分子生物学实验平台主要为核酸、蛋白质等生物大分子的形态、结构、功能等研究提供技术与设备支持。实验室主要仪器设备：核酸电泳仪、蛋白质电泳仪、凝胶成像系统、化学发光凝胶成像系统、PCR扩增仪、梯度PCR仪、实时荧光定量PCR仪、、蛋白纯化仪、高速冷冻离心机、紫外-可见分光光度计、恒温培养箱、制冰机等等。致力于为科研人员解决分子生物学问题。

服务内容：PCR/Q-PCR/ChIP-PCR/SNP检测/甲基化监测（BSP/MSP）/载体构建/慢病毒包装

2.4.1 qPCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

分为SYBRGreen法与TaqMan探针法

荧光染料法：实验设计简单（仅需2个引物，无需设计探针），初始成本低，灵敏度高，但需要进行熔解曲线分析检验扩增反应的特异性。适用于非特异性检测（专一性要求不高或高通量检测）。

探针法：有高特异性（引物和探针共同于模板结合），高信噪比，能进行多重反应。但成本高，实验设计繁琐。适用于扩增序列专一检测。

2.4.2 慢病毒包装

以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础，使用疱疹病毒VSVG外壳蛋白发展起来的工具载体。其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。一经感染宿主细胞，慢病毒即利用反转录酶将其RNA转录成双链DNA，随后永久的整合到宿主细胞的染色体中，实现长时间稳定表达。此外，慢病毒免疫原性低，不易造成免疫反应，所以现在慢病毒系统除了被广泛应用到各种细胞系的基因敲除/敲入、基因过表达、RNA干扰、microRNA研究，还大量应用于活体动物实验中。

2.4.3 质粒构建

载体构建（vectorconstruction）是分子生物学研究常用的手段之一。依赖于限制性核酸内切酶、DNA连接酶和其它修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

2.4.4 生化检测

生化检查是指以生化手段定性、定量地分析酶、蛋白质及其代谢产物，是临床上诊断单基因病的首选方法，其中最常见的是检查酶的缺陷。

因为基因控制着酶、蛋白质的合成，从而控制着机体的一系列代谢反应，所以基因突变所致的单基因病必然导致酶、蛋白质异常，其参与的代谢过程中的中间产物、底物、终产物也会发生质和量的变化。故通过这些物质的检测可以反映某种基因是否受损从而作出疾病的诊断。如苯丙酮尿症病人，可根据其血清中的苯丙氨酸浓度增高，尿液中含有苯丙酮酸作出诊断。白化病患者可根据毛囊中酪氨酸酶活性降低作出诊断。

2.5 显微成像平台

显微成像是细胞生物学研究不可或缺的重要技术手段，随着物理，光学，计算机和精密制造技术的发展，各种各样能满足不同需要的先进显微镜被不断开发出来，我们实验室将致力于开发新一代超分辨成像技术，在跨尺度结构上（分子、细胞器、细胞、组织）获取多维度信息（位置、角度、极性、运动状态），以促进纳米级别的原位生物学研究和定量分析，为揭示生命活动分子机制提供技术支撑。

服务内容：生物透射电镜（生物TEM）/冷冻SEM/生物扫描电镜（生物SEM）/流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦扫描显微镜/冷冻切片机/圆二色谱（CD）/NTA检测仪

2.5.1 透射电镜

2.5.2 扫描电镜

2.5.3 高分辨/激光共聚焦

超分辨-金黄色葡萄球菌

超分辨-大肠杆菌

植物原生质体

2.5.4 形态病理切片

肺组织/脑组织 HE染色

免疫荧光

2.5.5 NTA检测

NTA检测仪器型号为Zetaview，该设备具有单一颗粒跟踪技术，结合经典微电泳技术和布朗运动成为现代的分析手段。原理是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一；相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快 。通过子体积的扫描，来自于数以千计的颗粒的zeta电位和粒径柱状图的结果就可以计算出来。此外，颗粒浓度也可以通过视频计数分析得到。