生物扫描电镜制样流程（附视频）一e测试

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生物扫描电镜制样流程（附视频）

2024-03-11 14:43:46 0 2968

一、简介

生物扫描电镜主要利用二次电子成像用于拍摄材料的表面形貌情况，拍摄照片为黑白照片；一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等，也可以观察材料在细胞表面的分布情况。

二、送样要求

1.样本要求：仅接收2.5%戊二醛固定液固定后的生物样品；

（1）细胞样品：用1.5ml的尖底管，离心成团（至少黄豆大小），加入固定液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4°C固定12h后，用泡沫盒加冰袋低温保存运输。（细菌样品要求同细胞）

（2）块状样品：要求在不影响实验目的的前提下，观察面尽量平整，尺寸为厚 2~3mm、长宽 5~6mm。有正反观察面要求的，制样前要能够视觉区分，不能区分要在形状上做标记（可在样本右上角裁剪掉一块，右上角缺失面是正面（即观察面），不能用记号笔标记）。放置于4°C固定12h后可寄送；放置于4°C固定12h后，用泡沫盒加冰袋低温保存运输。

注意：样本管与冰袋隔开，避免固定液结冰。

2.打印填写完整的预约单和样品一起寄送；

3.测试周期1-2周，每样提供8张拍摄照片（不提供分析服务），如需更多照片请提前与工作人员沟通确认，并且会产生额外费用，请悉知！）

注意：不做磁性样本。

三、制样流程

1.取材

细胞团要求至少半个绿豆大小。悬浮培养细胞/细菌，离心收集，弃去培养液，加入2.5%戊二醛，于4°C保存。对于贴壁细胞，先倒去培养液，加入2.5%戊二醛，4°C固定15min，用细胞刮刮下，离心收集（固定液保留），于4°C保存。组织样本，离体1-3min内取样，1mm3。如来不及修整组织大小可先于电镜固定液内固定半小时左右待组织变硬以后再修整组织进行后固定。超出此范围后组织会无法完全固定，后续实验无法完成，务必请重视此过程。固定时间：至少4个小时。

2.固定

取好的样本，加4℃预冷的2.5-3%戊二醛，在4℃固定4h或过夜（视组织大小决定固定时间，该步骤可延长时间），吸出固定剂，用PBS（0.1M、不含NaCl）浸洗3-5次，每次15min。

3.脱水

用系列梯度酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%）脱水，每种浓度酒精脱水1次，每次10-20min（一般15min），再用100%酒精彻底脱水1-2次，接下来用醋酸异戊酯（香蕉水）替换2次，每次20min。

4.干燥

二氧化碳超临界干燥仪干燥样本。

5.样本导电处理

将样本紧贴于导电碳膜双面胶上放入离子溅射仪样品台上进行喷金处理30s 左右。

6.拍照：扫描电子显微镜下观察采图。

四、扫描制样视频

本文为e测试原创，未经允许，禁止转载！