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首页 测试百科 一文读懂表面等离子共振(SPR)

一文读懂表面等离子共振(SPR)

表面等离子共振 SPR

表面等离子共振( Surface Plasmon Resonance,简称SPR) 技术是一种基于光学原理发展而来的新型分析技术。是指光在棱镜与金属膜表面上发生全反射现象时,形成消逝波进入到光疏介质中,而在介质(假设为贵重金属)中又存在一定的等离子波,在基于能量守恒的前提下两种波段相遇时可能会发生的共振现象。该技术可以检测抗原与抗体、DNA 与蛋白、DNA 与DNA 之间的相互作用,已广泛应用于生命科学、医学诊断、食品安全及环境检测等领域。



SPR原理

SPR是借助传统光学现象,利用光在不同介质中产生消逝波后与等离子波产生共振,进而可以构建生物分子相互作用的生物传感分析技术,用以检测生物传感芯片上配位体与分析物之间的相互作用情况。

SPR生物传感器的光源为偏振光,传感芯片表面镀有一层金膜,实验时,先将一种生物分子(靶分子)固定在金膜表面,然后将与之相互作用的分子溶于溶液(或混合液)流过芯片表面。在金膜芯片上的蛋白和流路中的分子结合有解离的过程中,共振角(即SPR角)就会随之发生变化,检测器检测到这种变化,根据此变化曲线作图分析,可得出分子间的结合常数Ka、解离常数Kd或亲和力常数KD



SPR 测量系统

SPR 测量系统的核心部件包括光学系统、传感器芯片、液体处理系统三个主要部分,及其他的组成部分。

①光学系统:能够产生和测量SPR信号的光电组分称为光学检测单元。

②传感器芯片:传感器的芯片是其核心的部件。在SPR技术中必须首先有一个生物分子偶联在传感片上,然后用它去捕获可与之进行特异反应的生物分子。传感芯片又分为三个主要组成部分,分别是光波导耦合器件、金属膜以及分子敏感膜。

③液体处理系统:包括两个液体传送泵,其中一个泵负责保持稳定流速的液体流过传感芯片表面,另一个泵负责自动自动进样装置中的样品传送。

④其他部分:包括例如LED状态指示器和温度控制系统等。



SPR特点

①待分析物无需标记;

②实时动态监测(即定量结合亲和力、动力学和热力学);

③高通量能力非常灵敏,结果可重复;

④测量各种开机率、关断率和亲和力;

⑤所需待测样品量小;

⑥响应速度快



SPR应用

1、生物药物质量控制

①免疫原性的评价

生物药物具有免疫原性,当反复多次给药后,在动物甚至人体内会产生抗体,这可能是重组蛋白与天然蛋白之间结构或性质存在差异导致的。抗药抗体会与药物形成复合物,从而中和药物活性或影响药物的正常代谢。因此,免疫原性是评价生物药物安全性的重要指标之一。SPR技术灵敏度高,可以用于检测低浓度的抗体免疫原性。

②结合活性的测定

在多数生物药物的质量标准中,活性检测是评价药物有效成分效价的重要指标。活性检测一般分为结合活性检测和生物学活性检测,前者是评价药物与靶点受体结合的能力,后者评价药物与靶点结合后,诱导相关免疫学反应的能力。目前用于结合活性检测的技术主要是ELISA。SPR技术已被多家公司应用于治疗用单抗类产品结合活性的考察。

③宿主细胞DNA残留的检测

传代细胞系的残留DNA具有致瘤性、病毒传染性,且其相关代谢途径和机制未知,对人类健康造成一定威胁,因此需要对宿主细胞残留DNA进行质量控制。目前常用手段是q-PCR技术,但PCR技术存在耗时长、易污染等检测问题。有研究表明,SPR技术可用于 DNA 的检测。

④微生物污染的控制

绝大多数生物药物为静脉注射或皮下注射制品,需要严格控制微生物污染,否则会给患者带来极大的安全风险。目前常用培养法,来对细菌等微生物进行鉴定和控制。但该方法具有耗时长、易污染等缺点,现可将SPR技术应用于微生物检测中。

2、毒品检测

常见毒品均是小分子化合物,我国最常见的毒品类型主要有冰毒、氯胺酮及海洛因。为了控制毒品的滥用,开发有效、快速的检测方法及其重要。目前SPR技术已经能够对大多数毒品分子进行检测。

3、爆炸物成分检测

爆炸物通常被用于个人犯罪和恐怖袭击,严重威胁着人民群众的生命和财产安全。实现对爆炸物有效成分的快检能有力打击涉爆犯罪,如公共交通中可疑爆炸物的检测,以及事故现场痕量爆炸物成分的鉴定。目前SPR传感器对爆炸物检测主要集中在DNT(二硝基甲苯)、TNP(2,4,6-三硝基苯酚)、TNT(2,4,6-三硝基甲苯)和RDX(三亚甲基三硝胺)。

4、食品安全

检测食品中的毒物残留是食品安全领域的一项重要任务。目前SPR技术可对食品中的杀虫剂、除草剂、生物毒素和环境污染物等进行检测。



参考文献

[1]杨晶晶. 表面等离子共振在Protein A小分子抑制剂筛选中的应用[D].上海交通大学,2018.DOI:10.27307/d.cnki.gsjtu.2018.003223.

[2]王鸣人,段徐华,邵泓,陈钢.表面等离子共振(SPR)技术在生物药物质量控制中的应用前景[J].中国药师,2020,23(11):2257-2260.

[3]王斌杰,叶昕宇,付立斌,吴元钊,许中石,王继业,应建波,姚伟宣.表面等离子共振技术在公安领域的研究现状及应用展望[J].山东化工,2021,50(15):58-60.DOI:10.19319/j.cnki.issn.1008-021x.2021.15.023.

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