液相色谱（HPLC）(二)一e测试

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液相色谱（HPLC）(二)

2022-01-21 16:12:46 0 4032

常见问题与其对策

液相色谱常见问题类型

A.压力异常(偏高、波动)

B.漏液

C.保留时间漂移

D.基线问题(漂移、噪声)

E.峰形异常

现象:无压力，流动相不流动可能原因

1、保险丝断或电源问题

2、柱塞杆折断

3、泵头内有空气或流动相不足(常见)

4、单向阀损坏

5、漏液(常见)

6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)

现象:压力偏高

1、流速设定过高

2、保护柱或柱子筛板堵塞(常见)

3、流动相使用不当或有缓冲盐析出

4、线路过滤器堵塞(常见)

压力偏低

1、流速设定过低

2、柱温过高

3、系统漏液

现象:压力波动可能原因

1、泵头中有气泡

2、脱气不充分

3、系统漏液

4、单向阀脏

5、柱塞密封圈损坏

一漏液

1、接头处松动(柱接头及其它管路接头)

2、接头磨损(peek头)

3、泵密封损坏(泵单元)

4、转子密封损坏(进样单元)

5、流通池垫片或透镜损坏(检测器)

一保留时间漂移

保留时间漂移

可能原因

1、柱温变化

2、流动相组分变化

3、色谱柱没有平衡

4、流速变化

5、泵中有气泡

6、流动相选择不当

7、键合相流失(柱效降低)

一基线问题

基线漂移可能原因

1、温度波动

2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)

3、流动相污染，变质

4、柱子正在平衡

5、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出

6、流通池被污染或有气泡

基线噪声大

可能原因

1、流动相、泵、检测器中有气泡

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成

3、有地方漏液

4、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀

5、流通池污染

6、检测池能量不足

7、系统内有气泡

8、其他电子设备的影响

一峰形异常

前沿峰、拖尾峰

可能原因

1、柱塞板堵塞

2、色谱柱塌陷

3、干扰峰

4、样品溶剂选择不当

5、样品过载

6、柱温过低

一峰形异常

分叉峰

可能原因

1、保护柱或分析柱污染

2、色谱柱塌陷

3、样品溶剂不溶于流动相或极性相差很大

4、样品浓度过高

一峰形异常

峰展宽

1.进样体积过大

2.流动相粘度过高

3.保留时间过长

4.柱外体积过大

一峰形异常

峰变形

可能原因

1、样品过载

2、样品溶剂选择不当

一峰形异常

鬼峰

1、进样阀残余峰

2、样品中未知物

3、柱未平衡

4、水污染

分离模式

液相色谱柱种类繁多，在精准选择液相色谱柱之前，首先必须选择HPLC的分离模式，根据使用的固定相和流动相的组合不同，可以得到下列各种各样的分离模式。

了解样品

了解待检样品的结构、分子量、溶解性、离子化、极性、pH值等物理化学性质，再参照下图选择适合的分离模式和精准的液相色谱柱固定相：

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