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激光共聚焦扫描显微镜

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激光共聚焦扫描显微镜须知:

1. 样品要求:

溶液要求:准备至少比测量浓度高100倍的母液(例如若需要测试浓度为0.1mg/mL时,需要准备的样品浓度为10mg/mL),最好溶解在PBS(磷酸盐缓冲液)中;细胞瓶放满培养基常温寄过来即可。

粉末要求:能够溶于PBS/水/DMSO中。每个样品至少提供1mL或10mg;

块体:长宽不超过1cm,或直径不超过1cm,膜最好500um以下,基底厚度没要求。

备注:若做细胞摄取实验或其他亚细胞器的定位实验时,要求样品自带荧光。

2. 如有其他疑问,请联系前期对接的技术顾问。


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常见问题

1.激光共聚焦拍照和普通荧光显微镜拍照有什么不同?

答:共聚焦用激光作为光源,光电倍增管做检测器,逐点扫描,对应每个像素其能量比较高;汞灯虽然总功率高,但属于场照明,对应每个像素的能量并没有激光高。激光共聚焦有针孔,可以排除焦平面上焦点以外及非焦平面杂散光的影响,因为空间分辨率提高,但因为是每个像素每个像素逐点扫描,采集较慢,一张图并不是同一时间采集的,时间分辨高不高;CCD拍照取的是样本的同一时间。

2.激光共聚焦荧光通道的颜色是实际颜色吗?

答:不是,是伪彩色,光电倍增管只检测强度信息,不检测颜色信息。颜色可以进行更改。不过可通过发射波长的范围,判断大概是什么颜色。

3.激光激发肯定比汞灯激发荧光强吗?

答:不一定,首先激光是单色光,如488nm,而汞灯下,有一定宽度的波长范围,如470-495nm,激发波长不一样,得到图片的效果也不一样;其次,激光下采集荧光用共聚焦模式,样本层切的比较薄,而汞灯下用CCD采集图片,样品层切的比较厚。因此看弱荧光,经常是激光不如汞灯看的更好。



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