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ELISA

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ELISA须知:

1.简介

酶联免疫吸附实验,即酶联免疫吸附实验,其基本原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面,加入待检标本,通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。ELISA技术作为免疫标记技术(包含免疫荧光技术,免疫放射技术,免疫酶技术和免疫胶体金技术)中的一种,已广泛应用于科研和临床实验中,具有快速、定性或者定量甚至定位的特点。

ELISA可用于测定抗原,也可以测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体;②酶标记的抗原或抗体;③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检验方法。

2.服务流程:

elissa.png


3.送样须知:

1、血清:干燥管(黄色)或促凝管(红色)收集全血,室温自然凝固10-20min,离心5-10min(2500-3500rpm/min)。采血过程中应避免溶血,仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心;

2、血浆:抗凝管(紫色、黑色、绿色)收集全血,采集后马上混匀,静置10min左右,离心5-10min(2500-3500rpm/min)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心;

3、尿液:用无菌管收集,离心10-20min(2500-3500rpm/min),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心;

4、粪便:用无菌15ml离心管收集, 1g样本+9ml PBS(0.01M,pH=7.4),充分匀浆完离心5-10min(2500-3500rpm/min),取上清备用;

5、细胞:检测分泌性的成份:用无菌管收集,5-10min(2500-3500rpm/min),仔细收集上清;细胞内指标:吸去培养板内的培养基,胰酶消化细胞,收集细胞沉淀,PBS(0.01M,PH=7.4)清洗一次,PBS稀释细胞悬液,细胞浓度达到1×107个/ml左右,充分研磨后超声裂解(或反复冻融),以使细胞破坏并放出细胞内成份,离心5-10min(2500-3500rpm/min),取上清备用

6、动物组织:用无菌15ml离心管收集, 组织重量不能低于50mg,1g组织加入9ml PBS(0.01M,PH=7.4),手工或匀浆器将标本匀浆充分,匀浆过程中,PBS分2次加进去,这样匀浆更充分。充分匀浆完离心5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清备用(切勿加入细胞裂解液)

7、植物组织:用无菌15ml离心管收集, 组织重量不能低于50mg,1g组织加入9ml PBS(0.01M,PH=7.4),手工或匀浆器将标本匀浆充分,匀浆过程中,PBS分2次加进去,这样匀浆更充分。充分匀浆完离心5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清备用(切勿加入细胞裂解液)

8、待测指标试剂盒(可由公司代购),待测样品(若不能及时检测,请将样品保存于-20℃或按照相应说明书要求进行保存,长期保存于-80℃,避免反复冻融)

4.公司服务:

实验报告(仪器设备厂家型号、实际品牌货号、实验方法及实验结果),原始实验数据。

5.试验周期:

1-2周,具体试验周期请预约前与工作人员沟通。

e测试小贴士:

image.png1、白板现象,无信号出现:

原因:试剂已过保护期,不同批次稀释液交叉使用;洗板机或加样过程中酶标记物被污染失活,稀释液中含有酶抑制剂;洗涤剂是浓缩型,没有按比例稀释。

          2、显色灵敏度低,仅有微弱信号出现:

原因:洗涤剂稀释倍数不符合要求,洗板次数过多,洗板冲击力太大,洗板浸泡时间过长;底物显色太短。

 




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