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TUNEL
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TUNEL


原因1:样本处理不当
(1)样本切片太厚。建议适当将切片切薄一点,便于染色。
(2)脱蜡和水化不充分。建议脱蜡先60 ºC 20 min,再使用二甲苯两次5-10 min;而水化用梯度乙醇从高到低浓度浸洗。
(3)Proteinase K的孵育时间过短。优化Proteinase K的孵育时间,常用时间10-30 min。4 μm左右的片子孵育10 min,30μm左右的片子孵育30 min。
(4)Proteinase K浓度过低。建议蛋白酶K一般工作液浓度为20 μg/mL。
(5)放置在-20 ºC保存较长时间的切片不新鲜,减低染色效率。建议使用新鲜切片。
原因2:染色操作不当
(1)染色时间过短。建议一般 37 ºC 孵育60 min,可以根据凋亡损伤程度,可长至2 h,但要结合背景着色。
(2)TdT酶或荧光素/酶标记的dUTP浓度过低。建议适当提高TdT酶或荧光素/酶标记的dUTP浓度。
(3)TdT酶失活。建议TUNEL反应液临用前配制,短时间在冰上保存。不宜长期保存,长期保存会导致TdT酶失活。
(4)样本干燥。加上TUNEL反应液后,请盖上盖玻片/保鲜膜/湿盒中进行,保证样本均匀染色,又可防止反应液干燥。
满意度: 98%

400-005-5990