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TUNEL

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TUNEL

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项目介绍

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

样品要求

贴壁细胞或细胞涂片，固定后低温寄送；

悬浮细胞或细胞悬液，收集收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟，低温寄送。

石蜡切片可常温寄送。

结果展示

TUNEL

常见问题

荧光信号弱或没有荧光信号

原因1：样本处理不当

（1）样本切片太厚。建议适当将切片切薄一点，便于染色。

（2）脱蜡和水化不充分。建议脱蜡先60 ºC 20 min，再使用二甲苯两次5-10 min；而水化用梯度乙醇从高到低浓度浸洗。

（3）Proteinase K的孵育时间过短。优化Proteinase K的孵育时间，常用时间10-30 min。4 μm左右的片子孵育10 min，30μm左右的片子孵育30 min。

（4）Proteinase K浓度过低。建议蛋白酶K一般工作液浓度为20 μg/mL。

（5）放置在-20 ºC保存较长时间的切片不新鲜，减低染色效率。建议使用新鲜切片。

原因2：染色操作不当

（1）染色时间过短。建议一般 37 ºC 孵育60 min，可以根据凋亡损伤程度，可长至2 h，但要结合背景着色。

（2）TdT酶或荧光素/酶标记的dUTP浓度过低。建议适当提高TdT酶或荧光素/酶标记的dUTP浓度。

（3）TdT酶失活。建议TUNEL反应液临用前配制，短时间在冰上保存。不宜长期保存，长期保存会导致TdT酶失活。

（4）样本干燥。加上TUNEL反应液后，请盖上盖玻片/保鲜膜/湿盒中进行，保证样本均匀染色，又可防止反应液干燥。

满意度： 98%

王** 测试中老师及时跟进，很细心，谢谢
魏** 数据达到了预期，十分感谢
翟** 加急处理的，结果还提前出来了，真棒
赵** 测试好多次了，一直挺好的
孟** 服务很好，下次还会来

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贴壁细胞或细胞涂片，固定后低温寄送；

悬浮细胞或细胞悬液，收集收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。 用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟，低温寄送。

石蜡切片可常温寄送。

悬浮细胞或细胞悬液，收集收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟，低温寄送。