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细菌生理生化指标测定

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细菌生理生化指标测定须知:

1、简介:

微生物生化反应是根据化学反应来检测微生物的代谢产物,生化反应一般用来鉴别一些在形态上和其他方面不易区别的微生物,因此微生物反应是微生物类别鉴定中的重要依据之一。

1)糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。

试验方法;以无菌操作,用接种针或环移取纯培养物少许,接种干发酵液体培养基管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。接种后,置36+1.0℃培养,每天观察结果,检视培养基颜色有无改变(产酸),小倒管中有无气泡,微小气泡亦为产气阳性,若为半固体培养基,则检视沿穿刺线和管辟及管底有无微小气泡,有时还可看出接种菌有无动力,若有动力,培养物可呈弥散生长。

本试验主要是检查细菌对各种糖,醇和糖苷等的发酵能力,从而进行各种细菌的鉴别,因而每次试验,常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫,溴百里蓝和An-drade指示剂。

2)淀粉水解试验

某些细菌可以产生分解淀粉的酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇础不再变蓝色。

试验方法:以18~24h的纯培养物,涂布接种干淀粉琼脂斜面或平板(一个平板可分区接种,试验数种培养物)或直接移种干淀粉肉汤中,于36+1℃培养24~48h,或于20℃培养5天,然后将础试剂直接滴浸干培养表面,若为液体培养物,则加数滴础试剂干试管中。立即检视结果,阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环,或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。

淀粉水解系逐步进行的过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间,培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性,以pH7.2最话,淀粉琼脂平板不宜保存干冰箱,因而以临用时制备为妥。

3)V-P试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中的氧氧化为二酰,二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物,称V-P(+)反应。

试验方法:

A:OMeara出法·将试验菌接种干通里培养其:+36+1℃培养48h 培养液1m加O’Meara试剂(加有03%助酸Creatine或西西

Creatinine的40%氢氧化钠水溶液)1ml,摇动试管1~2min,静置千室温或36+1℃恒温箱,若4h内不呈现伊红,即判定为阴性。亦有主张在48~50°℃水浴放置2h后判定结果者。

B:Barritt氏法:将试验菌接种干通用培养基,干36+1℃培养4天,培养液2.5ml先加入a萘酚(2-na-phthol)纯酒精溶液0.6ml.再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml,摇动2~5min,阳性菌常立即呈现红色,若无红色出现,静置千室温或36+1℃恒温箱,如2h内仍不显现红色,可判定为阴性

C:快速法:将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环,乳化接种于其中,加入5%a-萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动后放置5min,判定结果,不产酸的培养物不能使用。

木试验一般用干肠杆菌科各菌属的鉴别,在用干芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时,通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生,故应省去或以氯化钠代替。

2、服务流程:


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3、送样须知:

冻存菌株,需干冰寄送。


4、交付内容:

实验报告(包括仪器品牌,设备型号,试剂品牌货号等),原始数据。


5、试验周期:

具体试验周期请于工作人员联系。






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