细菌生理生化指标测定一e测试

预约须知

1、简介：

微生物生化反应是根据化学反应来检测微生物的代谢产物，生化反应一般用来鉴别一些在形态上和其他方面不易区别的微生物，因此微生物反应是微生物类别鉴定中的重要依据之一。

1）糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。

试验方法;以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种干发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36+1.0℃培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变(产酸)，小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管辟及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。

本试验主要是检查细菌对各种糖，醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。

2）淀粉水解试验

某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇础不再变蓝色。

试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种干淀粉琼脂斜面或平板(一个平板可分区接种，试验数种培养物)或直接移种干淀粉肉汤中，于36+1℃培养24~48h，或于20℃培养5天，然后将础试剂直接滴浸干培养表面，若为液体培养物，则加数滴础试剂干试管中。立即检视结果，阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环，或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。

淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最话，淀粉琼脂平板不宜保存干冰箱，因而以临用时制备为妥。

3）V-P试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P(+)反应。

试验方法:

A：OMeara出法·将试验菌接种干通里培养其:+36+1℃培养48h 培养液1m加O’Meara试剂(加有03%助酸Creatine或西西

Creatinine的40%氢氧化钠水溶液)1ml，摇动试管1~2min，静置千室温或36+1℃恒温箱，若4h内不呈现伊红，即判定为阴性。亦有主张在48~50°℃水浴放置2h后判定结果者。

B：Barritt氏法:将试验菌接种干通用培养基，干36+1℃培养4天，培养液2.5ml先加入a萘酚(2-na-phthol)纯酒精溶液0.6ml.再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置千室温或36+1℃恒温箱，如2h内仍不显现红色，可判定为阴性

C：快速法:将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%a-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果，不产酸的培养物不能使用。

木试验一般用干肠杆菌科各菌属的鉴别，在用干芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。

2、服务流程：

3、送样须知：

冻存菌株，需干冰寄送。

4、交付内容：

实验报告（包括仪器品牌，设备型号，试剂品牌货号等），原始数据。

5、试验周期：

具体试验周期请于工作人员联系。

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项目介绍

1、简介：

微生物生化反应是根据化学反应来检测微生物的代谢产物，生化反应一般用来鉴别一些在形态上和其他方面不易区别的微生物，因此微生物反应是微生物类别鉴定中的重要依据之一。

1）糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。

试验方法;以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种干发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36+1.0℃培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变(产酸)，小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管辟及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。

本试验主要是检查细菌对各种糖，醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。

2）淀粉水解试验

某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇础不再变蓝色。

试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种干淀粉琼脂斜面或平板(一个平板可分区接种，试验数种培养物)或直接移种干淀粉肉汤中，于36+1℃培养24~48h，或于20℃培养5天，然后将础试剂直接滴浸干培养表面，若为液体培养物，则加数滴础试剂干试管中。立即检视结果，阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环，或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。

淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最话，淀粉琼脂平板不宜保存干冰箱，因而以临用时制备为妥。

3）V-P试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P(+)反应。

试验方法:

A：OMeara出法·将试验菌接种干通里培养其:+36+1℃培养48h 培养液1m加O’Meara试剂(加有03%助酸Creatine或西西

Creatinine的40%氢氧化钠水溶液)1ml，摇动试管1~2min，静置千室温或36+1℃恒温箱，若4h内不呈现伊红，即判定为阴性。亦有主张在48~50°℃水浴放置2h后判定结果者。

B：Barritt氏法:将试验菌接种干通用培养基，干36+1℃培养4天，培养液2.5ml先加入a萘酚(2-na-phthol)纯酒精溶液0.6ml.再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置千室温或36+1℃恒温箱，如2h内仍不显现红色，可判定为阴性

C：快速法:将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%a-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果，不产酸的培养物不能使用。

木试验一般用干肠杆菌科各菌属的鉴别，在用干芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。

样品要求

如需提供菌株，请提供冻存甘油菌，2支/菌，需干冰寄送；实验也可代购或使用实验室已有菌株。

结果展示

细菌生理生化指标测定

常见问题

糖发酵实验常见问题

现象:葡萄糖发酵中，三个菌种的溶液都变黄，为阳性;仅大肠杆菌杜氏小管含气泡。

分析:大肠杆菌能分解葡萄糖，产生甲酸等产物，并有甲酸解氢酶，可将其分解为CO2和 H2，故生化反应结果为产酸产气。而另外两种菌代谢产生了酸，但没有气体产生。另外，未知菌溶液临近表面处有一层深色区域，不像指示剂的颜色，可能为某种代谢产物。

甲基红试验

现象:甲基红试验中，大肠杆菌为深红色，说明其产生的酸最多:未知菌为桔红色，说明它产酸量中等:产气杆菌为黄色，说明它基本不产酸。

分析:大肠杆菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸等，使培养基的 pH降低，培养基呈现红色。产气杆菌在培养的早期产生有机酸,但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，使pH升至大约6，培养基呈现黄色。