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流式细胞分析
1.简介： 流式细胞术（flowcytometry，FCM）是利用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒同时进行多参数、快速定量分析和分选的高新技术。其特点是：第一，只要样本制备成单个细胞或生物颗粒悬液均可以分析。第二，测量速度快，每秒中可以测量数千个乃至数万个细胞。第三，同时测量每个细胞的多参数特征。2.样品处理：（以流式周期为例）⑴细胞收集：弃去上清，加入PBS清洗一次，再加入胰酶消化细胞，加入PBS终止消化，用移液枪轻轻吹打细胞，制备细胞悬液，700rpm离心5min收集细胞。⑵PBS洗涤细胞：加入PBS重悬细胞，700rpm离心5min，混匀。⑶固定过夜：加入预冷的75％乙醇，重悬细胞，4℃过夜固定。⑷PBS洗涤细胞：加入2mlPBS混匀后，700rpm离心5min收集细胞，PBS重悬，离心收集细胞。加入100ulPBS重悬细胞。⑸去除RNA：加入2μl浓度为1mg/ml的RNaseA（去离子水配制），37℃水浴40min。⑹荧光标记：加入100µl浓度为100µg/ml的PI染色液（PBS配制），避光染色20min。⑺上机检测：流式细胞仪使用激发波长488nm，发射波长585±21nm进行检测，用flowj软件分析细胞周期以确定细胞周期分布。
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