一、项目介绍

细胞侵袭（cell invasion）与细胞迁移是比较相似的，但是“侵袭”需要细胞穿过胞外基质层（ECM）或基底膜基质层（BME），这个过程是细胞先酶解去除ECM/BME的阻碍，然后在趋化因子浓度梯度驱使下完成从一处到另一处的移动。细胞迁移和侵袭这两种行为既有联系又有区别——迁移是在没有阻力的情况下的细胞移动，侵袭是需要裂解“阻力”后才能实现移动能力。总的来说，细胞侵袭是一种特殊的细胞迁移，侵袭细胞具有迁移能力，但不是所有的迁移细胞都具有侵袭性。

二、实验原理

来源：细胞迁移 - 搜索 图片 (bing.com)

三、实验流程

实验流程如下：

  （1）先用marker笔在6孔板背后，直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

  （2）在孔中加入计数好的细胞，具体数量因细胞不同而定（过夜能铺满即可）。

  （3）第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。

  （4）用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。

  （5）放入37度5%二氧化碳培养箱，培养0，6，12，24小时后取样，拍照。

实验流程如下：

（1） 换无血清或低血清培养基培养细胞，排除血清的影响。

（2）铺下室培养基：下室铺培养基（液体需刚刚好）；

        制备细胞悬液：使用胰酶消化细胞，制备细胞悬液；

        铺上室细胞：将上层小室放入下层小室，将细胞铺在上层小室中。

（3）继续培养：细胞培养箱中培养 24-48 小时，具体时间根据不同细胞而定。

（4）染色：先使用固定液固定细胞（防止细胞形态发生改变），然后使用结晶紫进行染色。

（5）拍摄及数据分析。

四、样品要求

液体类样本：按照单次检测需要的3-5倍的量寄送；

粉末类样本：按照单次检测需要的3-5倍的量寄送，可溶性粉末需注明溶剂，不可溶样本注明样本处理方法寄灭菌方法；

块体类样本：样本寄实验室后，实验室根据方法进行处理（三种处理方式可选择）

2、提供具体实验方案与要求（涉及到的细胞、耗材试剂盒本实验室均可有偿提供）。

注：以上送样条件仅做参考，具体送样与实验目的和要求相关，具体请联系e测试工作人员。

五、结果展示

 或 

  

使用光学显微镜进行白光拍摄，一般提供3-6个视野，可选择不同倍数，需要了解详细的结果形式，请联系e测试工作人员。

四、常见问题

1、如何选择细胞划痕法或Transwell法？

细胞划痕：适用贴壁细胞的创伤愈合。

① 铺板时一般选择6孔板，因为6孔板大小适中，可保证有相当距离的平直划痕，便于观察、误差也很小。

② 实验时注意细胞生长状况，应当选择适当的细胞接种浓度。

① 选择实验细胞时需保证细胞状态良好。

② 放入小室时，小心不要产生气泡。

将冻融后的Matrigel分装在多个小管，迅速冷冻并保存，避免多次冻融。所有用品在使用前需置于冰浴，必须使用预冷的移液管、吸头及小管操作Matrigel。

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