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流式细胞分析

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流式细胞分析须知:

1.简介

在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成。

流式细胞仪的流体系统负责将样品从样品管转移到流动池。一旦通过流动池(并通过激光束),样品将被分选出来(在细胞分选仪中)或移到废液中。

光学系统的元件包括激发光源、透镜和滤光片(用于收集和移动仪器周围的光)以及用于产生光电流的检测系统。

电子系统是流式细胞仪的大脑。来自检测器的光电流经过数字化、处理和保存,以用于后续分析。

2.样品处理:

⑴细胞收集:弃去上清,加入 PBS清洗一次,再加入胰酶消化细胞,加入PBS终止消化,用移液枪轻轻吹打细胞,制备细胞悬液,700 rpm离心5 min收集细胞。

⑵PBS洗涤细胞:加入PBS重悬细胞,700 rpm离心5 min,混匀。

⑶固定过夜:加入预冷的75%乙醇,重悬细胞,4℃过夜固定。

⑷PBS洗涤细胞:加入2 ml PBS混匀后,700rpm离心5 min收集细胞,PBS重悬,离心收集细胞。加入100 ul PBS重悬细胞。

⑸去除RNA:加入2 μl 浓度为1 mg/ml 的RNaseA(去离子水配制),37℃水浴40 min。

⑹荧光标记:加入100 µl浓度为100 µg/ml 的PI染色液(PBS配制),避光染色20 min。

⑺上机检测:流式细胞仪使用激发波长488 nm,发射波长585±21 nm进行检测,用flowj软件分析细胞周期以确定细胞周期分布。

3.送样须知:

请务必认真填写预约界面各项内容;寄送样品时请您附带一份送样单;请将样本置于1.5ml低吸附管里,在管上清楚地标明样本名称(与本表“样品名称”保持一致),用parafilm膜将样本管密封后置于50毫升离心管或类似容器里,旋紧盖子。样品包装请套上自封袋,并做好防震措施,以免运输过程中损坏样品。;流式细胞术一般每个样品上机检测2次,以验证样品均一性和仪器稳定性,务必寄送可以满足一次以上实验的样品量,以免反复寄送,如所需样品量不清楚请及时与工作人员联系;不接收邮寄细菌、藻类、真菌、细胞等需要直接上机检测的样品,因为在邮寄过程中样品状态发生变化会导致检测结果不准确。


4.需要提供:

待测样品;填写完整的预约信息(包括样品信息、溶剂信息、溶解浓度、工作浓度、处理事件、需要的检测试剂盒等)。

5.交付内容:

提供数据分析报告及分析结果图片;流式细胞术实验(细胞周期除外)报告一般包括:原始文件(.fcs格式)、FlowJo分析结果(.wsp格式)、FlowJo分析结果统计(.xls格式)、FlowJo分析结果代表图片和Graphpad Prism分析结果、实验报告;细胞周期实验包括:原始文件(.fcs格式)、Modfit分析结果(.mlf格式)、Modfit分析结果(.tif格式)、 Graphpad Prism分析结果、实验报告。

6.试验周期:

收到样品2-3周左右时间,具体试验周期请预约前与工作人员沟通确认。

 




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