免疫组化/免疫荧光一e测试

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免疫组化/免疫荧光

满意度： 98%

仪器型号：

美国-Thermo Fisher-HM525 NX，德国-Leica-RM2016

预约次数：

412次

服务周期：

平均6.7-18.4个工作日

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项目介绍

样品要求

结果展示

常见问题

预约须知

1、免疫组化和免疫荧光项目

（1）需要确认样本物种、组织部位、样本状态、样本量及需要做的实验项目；

（2）有些组织，如脑，需要确认切面要求；

（3）若选择普通荧光拍照或共聚焦拍照，需确认拍照的部位，并提供参考图；需要确认拍照倍数；一般默认不提供明场照片，若需要，需在预约单里备注；

（4）确认是否提供适用于免疫荧光/组化实验的抗体，若提供，需提供10μL及说明书，且需注意免疫荧光双标一抗种属来源需不一致；若不提供，可使用公司抗体库内抗体，使用费咨询工作人员；若需购买，可由公司代购，使用完毕后可寄回；

（5）不提供免疫荧光图片分析。

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项目介绍

1、免疫组化

是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（ immunohistochemistry，IHC）。

2、免疫荧光

免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。

样品要求

免疫组化染色/免疫荧光染色送样要求：

1.包埋：石蜡包埋、OTC包埋。

（1）标本要求：已固定在4％多聚甲醛中的动物组织，或已固定在FAA中的植物组织。

（2）送样要求：

a. 动物组织：处死动物后立即取材，生理盐水冲洗表面，4%的多聚甲醛固定，一般组织固定48h左右进行包埋最好，大小不超过1cm*1cm*0.5cm，装组织的管子一定要比组织大，固定液是样品体积的5倍以上，以保证充分固定，封口膜封好避免运输过程中固定液洒出。

注：常温或少量冰袋运输。

2.切片：石蜡切片、冰冻切片。

（1）标本要求：已包埋的动物。

（2）送样要求：

a. 石蜡包埋的组织：冰袋运输。

b. OTC包埋的组织：干冰运输。

3.染色:

a. 石蜡切片：脱蜡至水、抗原修复、血清封闭、一抗孵育、二抗孵育、染核、脱水、透明、封片。

b. 冰冻切片：清洗去除OTC、血清封闭、一抗孵育、二抗孵育、染核、脱水、透明、封片。

（1）标本要求：切片。

（2）送样要求：

a. 石蜡切片：石蜡切片码齐装在塑料切片盒中，冰袋运输。

b. 冰冻切片：冰冻切片码齐装在塑料切片盒中，干冰运输。

4.拍照：普通荧光拍照、荧光数字扫描、激光共聚焦（免疫荧光可拍摄）。

（1）标本要求：已染色的切片。

（2）送样要求：已染色的切片，常温或少量冰袋运输。

结果展示

免疫组化：

免疫荧光：

（图片依次为免疫荧光单标、双标、三标、四标）

常见问题

产生组织切片非特异性染色的原因

抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条；
一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看；
内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；
非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；
DAB孵育时间过长或浓度过高；
PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；
标本染色过长中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。

背景过深的原因

可能是一抗浓度高；需要调整DAB孵育时间；考虑血清封闭的时间是否过短；适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。

咨询热线

400-005-5990