生物透射电镜可以观察生物细胞样品内部形态。一般用来观察细胞整体结构、细胞膜细胞壁细胞器的变化、材料进入细胞内部的分布情况或者细胞受到外界刺激产生的自噬小体等结构，以及外界生物入侵的侵染结构等等。

论文致谢

何**

西南大学北培校区

Biomatierals

原文链接 A robust Au@Cu2-xS nanoreactor assembled by silk fibroin for enhanced intratumoral glucose depletion and redox dyshomeostasis

影响因子：15.3040

现金奖励：566.00

申请时间：2023-02-21 10:11:32
胡**

四川大学

Theranostics

原文链接 Controlled intracellular aggregation of magnetic particles improves permeation and retention for magnetic hyperthermia promotion and immune activation

影响因子：11.6000

现金奖励：283.00

申请时间：2023-03-27 14:35:25
张**

三峡大学

Inorganic chemisty frontiers

原文链接 Facile synthesis of three-dimensional Co/N co-doped carbon nanocuboid for enhanced oxygen reduction reaction

影响因子：7.7790

现金奖励：366.00

申请时间：2023-03-09 19:13:54

预约须知

1. 样本仅接收2.5%戊二醛固定后的样本，冰袋寄送，切勿冷冻结冰，特殊样本需要提前沟通

2. 需按照规范取样、固定详情可参考官网页面，避免取材固定不当影响测试结果

3. 请仔细在下单页面中填写您的测试要求、拍摄倍数/标尺（二选一）和参考图（例如：观察细胞铁死亡、细胞凋亡、自噬等；5000倍3张、或5um4张）

4. 不接收含有坚硬材料的样本，客户需对样品信息的真实性负责，若故意有所隐瞒，在测试过程中对设备造成损坏等一切后果将由您全部承担！

5. 提供10张拍摄照片（不提供分析服务），如需更多照片请提前与工作人员沟通确认，并且会产生额外费用，请悉知！如有其他疑问，请联系前期对接的技术顾问。

6. 寄样时将预约单打印一并寄送，在送样袋子上标注清楚订单号，以便实验室收到后顺利安排实验

7. 样品管上编号需要按照下单页面上的编号，尽量简化编号

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项目介绍

生物透射电镜是观察生物细胞样品内部形态的重要工具，其电压在80-120kv可以降低生物样品因高能电子束辐射而损伤的影响，同时依赖于生物样品制备技术的发展，如超薄切片技术、负染色技术、冷冻制样技术、细胞化学技术等，广泛应用于组织学、细胞学、病毒学、病理学及材料学等多个学科的研究中，一般用来观察细胞整体结构、细胞膜细胞壁细胞器的变化、材料进入细胞内部的分布情况或者细胞应付外界刺激产生的自噬小体等结构，以及外界生物入侵的侵染结构等等。

样品要求

取材是电镜实验的第一步，其操作成功与否直接关系到电镜结果的好坏。为了得到好的结果，请务必按要求做好取材！取材基本要点：快（1min）、准（部位准确）、小（1 mm3）、净（无杂质）、柔（避免机械损伤）。不同的样品，取材细节上有很大区别！

① 快：取材操作要快捷。样品在离体后以最快的速率浸入初固定液，以免长时间缺血缺氧引起组织细胞自溶，并防止微生物繁殖导致样品腐败，破坏精细结构。

② 准：由于电镜标本要求小块取材，为了电镜观察的准确性，取材部位必须要准确，而且，不同实验组的标本尽量取在相同部位（如心肌组织取左心室，则一律取左心室），否则，将无法比较，进而影响观察结果。

③ 小：由于受电镜固定液及包埋剂渗透速度的影响，因此，一般组织块的大小不超过1mm³。

④ 净：尽量少带血液和组织液进入固定液。但切忌用水直接冲洗，可用缓冲液（0.1MPBS）把表面的血液和组织液轻轻冲掉。

⑤ 柔：轻柔的操作可减少人为机械损伤，尽量避免金属器具对组织细胞的夹持、挤压和牵拉，从而影响最后拍摄效果。

注：样品大小跟固定剂有效渗透深度密不可分，固定液有效固定深度为1 mm3，因此要求客户按照此大小送样，样品成功与否80%-90%由前固定取材决定。

1、细胞样品:

① 悬浮细胞：轻微并短暂离心培养液后收集细胞，加入新鲜缓冲液，低温1000rpm/min（离心力不可过大，离心时间不可过长，避免机械挤压导致细胞变形，也可根据具体情况调整）离心5min，弃上清。滴加新鲜缓冲液重悬几分钟，低温1000rpm/min，离心5min，青弃上清，重复2遍。样品加入新鲜的2.5%戊二醛固定液后重悬，4℃固定过夜。收集细胞要肉眼可见细胞沉淀有绿豆大小，弃培养基后加电镜固定液4度避光固定24h（4°渗透速率过慢建议室温0.5h-1h后再放置4°），后续冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。敏感的细胞直接固定，不洗。

② 贴壁细胞：采用轻吹，刮刀（建议采用刮刀法，垂直刮取，避免反复）；若用胰酶消化0.5min后立即加入血清终止（贴壁牢的肿瘤细胞，可以消化+刮刀），置于尖底1.5mL离心管中，滴加1小滴固定液立即混匀（勿使液体凝固），低温1000rpm/min离心5-10min，弃上清（不清洗）。收集绿豆大小的细胞沉淀置于尖底1.5mL离心管中。沿管壁小心加满4℃预冷新鲜的2.5%戊二醛固定液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中，建议加完固定液之后重悬下，让样本与固定液充分接触），放置于4°C固定12h后，用泡沫盒加冰袋低温保存运输。

注意：样本管与冰袋隔开，固定液切勿冷冻结冰。绿豆大小是最佳细胞量，如果样品比较珍贵较难富集也可小米粒大小或半个小米粒大小，样品量过少电镜下可视目标物较少，建议送样前光镜下先确认好细胞状态，细胞培养浓度铺满80%左右，例如用10cm培养皿大多情况能达到送样量。

2、细菌、真菌样本品：

① 液体培养：吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底绿豆大小，可以用PBS洗1-2次（此步骤不清洗电镜全是样品碎屑和杂质），弃掉上清液，沿管壁缓慢加入2.5%戊二醛固定液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4°C固定12h后，用泡沫盒加冰袋低温保存运输，注意：样本管与冰袋隔开，固定液切勿冷冻结冰。

② 固体培养：从培养基上刮取细胞群落，加入新鲜缓冲液，低温1000rpm/min离心5min后，弃上清。滴加新鲜缓冲液重悬15min，低温1000rpm/min离心5min，弃上清，重复2遍。样品加入戊二醛固定液后重悬，4℃固定过夜。（培养基上样品取材尽可能把琼脂分离，无法分离则需要标注正反面，避免电镜下可视浓度受影响）

注意：含有细胞壁的建议抽真空。

3、组织样本：

a: 浸泡固定：适用于一些能允许在短时间内停止供血而仍保持其功能和结构的器官或组织，以及一些病理检查的样品。其方法是经解剖（或手术）尽快从机体中取出所需组织，并按取材要求，把组织切成小块，放入离心管内常规固定。

b: 血管灌注固定（对于一些特殊要求的器官：脑、脊髓、睾丸等）：适用于取材较复杂或对缺氧较敏感的器官或组织，须采用血管灌注固定。灌注固定一般通过供血的动脉进行，小动物也可经左心室或升主动脉穿刺，行全身灌注。可根据动物的大小选用全身灌注或局部灌注的方式。参考方法：首先用50毫升生理盐水（37℃）清洗血液，接着用50毫升4%多聚甲醛固定液（37℃）快速灌注固定，然后用250-300毫升冷固定液（4℃）慢速灌入，持续5-10钟后精准取材，置组织于戊二醛固定液中，在4℃冰箱中固定。

肠、血管、皮肤、肌肉等有方向性样本需切成1mm*3mm*0.5mm长方体小块（如下图B），使用2mL离心管加满2.5%戊二醛固定液，需要提供切面方向，例如横切/纵切，如果不清楚需要提供测试目的，或者效果图，根据测试目的/效果图判断切面；无方向性的组织，如肝脏、肾脏、肺脏等可切成1mm³立方体小块（如下图A），使用2mL离心管加满2.5%戊二醛固定液，放置于4°C固定12h后，用泡沫盒加冰袋低温保存运输。注意：样本管与冰袋隔开，避免固定液结冰。固定液渗透能力有限，超出此范围后组织会无法完全固定，可能会影响后续结果，请务必重视此过程。

特别注意：取材时尽量精确到需要观察的目的部位（如观察肾小球取肾皮质；观察胰岛取胰岛丰富的胰尾；皮肤，肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定）。组织样品需要客户把要观测的区域暴露于表面，避免后续实验室采取半薄定位寻找目标区域，若目标区域较深内部精细结构是无法保留下来的，增加重新送样和复测的风险。

4、植物样本:

取材流程：PBS冲洗样品，确保无泥沙等污染物。然后用锋利刀片或剪刀将样品切成合适大小避免机械拉扯，装入电镜专用2.5%戊二醛+2%PFA多聚甲醛混合固定液中。不需要定位的样品切成1立方毫米大小（如叶片、果实、花粉等），需要定位的样品，切1mm×3mm×0.5mm的长条状（茎、根、表皮等）随后抽气，也可配合离心一起让组织能沉淀到管底，或者塞入棉花。并且提供切面方向，例如横切/纵切。最后样本充分固定后，用泡沫盒加冰袋低温保存运输，注意：样本管与冰袋隔开，固定液切勿冷冻结冰。

结果展示

参考图：

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常见问题

植物的根部为什么有时看不到细胞核？

植物细胞的细胞核相对比较小，不好切，切片的时候有可能没有切到，所以在观察透射电镜的时候会发现看不到细胞核。

切片染色的目的是什么？

由于生物样品主要由碳、氢、氧、氮等轻元素组成。这些元素原子对电子的散射能力很弱，相互之间的差别也很小。尤其生物超薄切片被树脂所包埋，这些包埋树脂对电子的散射能力与样品本身差别很小。因此生物样品超薄切片观察时像的反差极弱。为了提高图像的反差，要对超薄切片进行电子染色。这里所谓电子染色是根本不同于光学显微镜的染色，它是利用重金属盐（如铅盐、铀盐等）与细胞的某些成分或结构结合，由于重金属对电子散射能力很强，使那些与其结合的结构或成份对电子散射能力增强，从而达到提高样品本身反差的。目前最常用的染色剂是醋酸铀和柠檬酸铅染色液。

2.5%戊二醛固定液如何配置？

市售25%戊二醛水溶液 10ml

0.2M磷酸盐缓冲液（pH7.0） 50ml

蒸馏水加至 100ml