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首页 测试百科 扫描电镜生物样品制备方法

扫描电镜生物样品制备方法

TEM 生物制样

一、 取材 

组织块小于 3立方毫米(单细胞培养或收集展片于盖玻片或滤膜上) 。 

二、 固定 

前固定: 2.5%戊二醛(磷酸缓冲液配制)固定 2 小时或更长时间。 用 0.1M pH7.4 磷酸盐缓冲液漂洗三次,每次 10 分钟。 

后固定: 1% 锇酸固定液,固定 1-2 小时。 用 0.1M pH7.4 磷酸盐缓冲液漂洗三次,每次 10 分钟。 

三、 脱水 

* 脱水在 4 度冰箱内进行, 所有脱水步骤建议在专用的冷冻干燥杯中 进行,冷冻干燥杯请于实验前一天到电镜室领取。 

* 整个过程,样品不要暴露于空气。 

  1. 乙醇脱水,每一级 10-20分钟: 30%乙醇— 50%乙醇— 70%乙醇— 90%乙醇— 95%乙醇— 100%乙 醇;

  2. 然后从乙醇逐步过渡到叔丁醇, 纯叔丁醇每次 10 分钟,3 次以上; 此系列操作均在 25 度环境中进行; 

  3. 纯叔丁醇 4 度冰箱过夜,样品结晶。

四、 冷冻干燥 

* 需事先预约冷冻干燥时间; 第二天上午八点半讲冷冻结冰的样品用冰盒送至电镜室进行冷冻干 燥。 

五、 喷金


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