扫描电镜生物样品制备方法
2021-05-26 18:14:14 16 807
一、 取材
组织块小于 3立方毫米(单细胞培养或收集展片于盖玻片或滤膜上) 。
二、 固定
前固定: 2.5%戊二醛(磷酸缓冲液配制)固定 2 小时或更长时间。 用 0.1M pH7.4 磷酸盐缓冲液漂洗三次,每次 10 分钟。
后固定: 1% 锇酸固定液,固定 1-2 小时。 用 0.1M pH7.4 磷酸盐缓冲液漂洗三次,每次 10 分钟。
三、 脱水
* 脱水在 4 度冰箱内进行, 所有脱水步骤建议在专用的冷冻干燥杯中 进行,冷冻干燥杯请于实验前一天到电镜室领取。
* 整个过程,样品不要暴露于空气。
乙醇脱水,每一级 10-20分钟: 30%乙醇— 50%乙醇— 70%乙醇— 90%乙醇— 95%乙醇— 100%乙 醇;
然后从乙醇逐步过渡到叔丁醇, 纯叔丁醇每次 10 分钟,3 次以上; 此系列操作均在 25 度环境中进行;
纯叔丁醇 4 度冰箱过夜,样品结晶。
四、 冷冻干燥
* 需事先预约冷冻干燥时间; 第二天上午八点半讲冷冻结冰的样品用冰盒送至电镜室进行冷冻干 燥。
五、 喷金
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