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生物扫描电镜(生物SEM)

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常见问题

生物扫描电镜(生物SEM)

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仪器型号:
SEM 蔡司 +Sigma 500//EDS Oxford 能谱仪,日本-日立-SU3500,日本-日立-SU8000,日立 s-4800-场发射扫描电子显微镜,日立,HITACHI Regulus 8100;牛津仪器,AZtecLive Ultim Max 100,生物扫描电镜等
预约次数:
629次
服务周期:
平均5-20个工作日
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论文致谢
预约须知

1. 样品要求:仅接收2.5%戊二醛固定后的生物样品;样品需新鲜取材,放置于1.5mL离心管内,加入2.5%戊二醛固定液4℃过夜固定。

2.寄送要求:戊二醛固定液充满1.5mL离心管,封口膜封口,离心管外用气泡膜或报纸包裹厚一些,放置2-3个(-20℃冰袋,不要太多),务必与样品隔开,避免低温冰冻造成样品结冰。特殊样品如脂肪、植物等用纱布将样品压到液面以下,保证充分固定。

3. 特别注意:是否需取材、固定、脱水、干燥、导电处理;形貌拍摄由于其特殊性,老师会尽力拍摄,但无法保证一定会拍到您预期效果的图片,敬请理解!

4.每样提供8张拍摄照片(不提供分析服务),如需更多照片请提前与工作人员沟通确认,并且会产生额外费用,请悉知!

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项目介绍

    生物扫描电镜主要利用二次电子成像用于拍摄材料的表面形貌情况,拍摄照片为黑白照片;一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等,也可以观察材料在细胞表面的分布情况。

样品要求

样本要求:

(1)细胞样品用1.5ml的尖底管,离心成团,加入2.5%的戊二醛溶液(固定液加满离心管,使样品完全浸没在固定液中),放置于4°C固定12h后可寄送。

(2)组织样本(新鲜取材)按要求将组织切成1mm³左右小块,固定于2.5%戊二醛固定液放置于4°C固定12h后可寄送;

(3)打印填写完整的预约单、送样单和样品一起寄送。



样品取材及固定常用方法 :

      细胞类:106以上的细胞,用细胞刮刀刮下来,1500-3000转离心,5-10min,收集细胞于1.5ml或2ml离心管,管底肉眼可见2-3粒大米状样品,如果细胞量很多,把细胞团块用细针尖挑成几个小团块,弃上清,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,固定液完全浸没样品,然后放入4°C冰箱过夜。 

      组织类:新鲜取材,取材位置准确,组织大小尽量在1-2mm³,离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中,固定液完全浸没组织,然后放入4℃冰箱过夜。 

      细菌类:吸取OD0.5-0.8的培养物,离心后弃培养基,收集菌体沉淀于管底黄豆大小,沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液,固定液完全浸没样品,然后放入4°C冰箱过夜。


结果展示


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图1:玉米淀粉                         图2:大肠杆菌                             图3:金葡菌






常见问题
不导电或导电差的样品,为什么要喷金?

SEM成像,是通过检测器获得二次电子和背散射电子的信号。如样品不导电或导电性不好,会造成样品表面多余电子或游离粒子的累积不能及时导走,一定程度后就反复出现充电放电现象(charging),最终影响电子信号的传递,造成图像扭曲,变形、晃动等现象,喷金后样品表面导电增强,从而避免积电现象。

细胞原位观察,怎么准备样品?

可以用细胞爬片(可以区分正反面。不能用记号笔标记)培养细胞,培养后装入5mL或者10mL离心管,后续加满戊二醛固定液4℃固定12h,低温保存寄送。    


2.5%戊二醛固定液如何配置?

市售25%戊二醛水溶液                10ml

0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0)      50ml

蒸馏水加至                                  100ml

预约须知

须知:

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